小鼠ELISA試劑盒操作步驟及實(shí)驗提醒

　　小鼠ELISA試劑盒操作步驟：

　　1. 標準品的加樣：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;。

　　2. 加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

　　3. 加酶：每孔加入酶標試劑100μl，空白孔除外。

　　4. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。

　　5. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。

　　6. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

　　7. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

　　8. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時(shí)藍色立轉黃色)。

　　9. 測定：以空白孔調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

　　實(shí)驗提醒：

　　1、混合蛋白溶液時(shí)，避免起泡。

　　2、加校準品與樣本時(shí)，每個(gè)校準品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應該懸臂加樣，避免交叉污染。

　　3、合適的溫育時(shí)間，和充分的洗滌步驟，是保證實(shí)驗結果準確性的必要條件。

　　4、底物溶液為無(wú)色液體，保存過(guò)程中變?yōu)樗{色，代表底物溶液已經(jīng)失效，不得使用。

　　5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致，加入終止液后，藍色底物產(chǎn)物，會(huì )瞬間變?yōu)辄S色。

　　6、實(shí)驗中，用剩的板條，應立即放回自封袋中，密封(低溫干燥)保存。

　　7、所有液體組分，使用前充分搖勻，嚴格按照說(shuō)明書(shū)標明的時(shí)間、加樣量及加樣順序進(jìn)行溫育操作。

　　8、檢測必須符合實(shí)驗室管理規范的規定，嚴格防止交叉污染，所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應按照傳染物進(jìn)行處置。

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